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人外周血白細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法WBC1077k
 
（細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)）
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

 
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 
首先取抗凝血，根據(jù)樣本量大小，分以下兩種情況：
 
情況 A：血液樣本量小于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：
 
1.       取一支 15ml 離心管，先加入 5ml 分離液
 
2.       用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min（注：如改
變血液樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時(shí)間，具體離心條件需客戶自行摸
 
索，以達(dá)到分離效果。）
 
3.       離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細(xì)胞層（一層或兩層），加入 10 ml 清洗液（產(chǎn) 品編號(hào)：2010X1118），混勻細(xì)胞。250g，離心 10min。重復(fù)洗滌 2-3 次，即得所需白細(xì) 胞。
 
4.       如有紅細(xì)胞殘留請(qǐng)使用紅細(xì)胞裂解液（產(chǎn)品編號(hào)：NH4CL2009）裂解紅細(xì)胞，具體操
 
作方法詳見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液使用說(shuō)明”。
 
情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：
 
1.       取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，先加入與樣本等量的分離液。
 
2.       將血液樣本小心加于分離液之液面上，450-650g（zui大離心力可至 1000g），離心 20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心 時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到分離效果。加入血液樣本后，樣 本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二）。
 
3.       剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 與步驟 4。
 
【注意事項(xiàng)】
 
1.    全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，zui 好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò) 6h 后 分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
 
2.    本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會(huì)變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。
 
3.    分離液用量大于稀釋后血液樣本時(shí)，分離效果更佳。
 
4.    當(dāng)血液樣本粘度過(guò)高需稀釋時(shí)，*稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號(hào)： 2010C1119）1:1 稀釋混勻備用。注：不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞?huì)降低細(xì)胞得率及活性。如血液樣 本經(jīng)過(guò)稀釋則分離過(guò)程中需適當(dāng)降低離心力和離心時(shí)間。
 
5.    如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低，請(qǐng)以尋求幫助，具體詳 見(jiàn)下方生產(chǎn)企業(yè)信息。
 
【儲(chǔ)存條件及有效期】
 
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實(shí)驗(yàn)白細(xì)胞提取率及純度大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
 

 
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
 
1.       所獲得白細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
 
2.       所獲得白細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
 
3.       所獲得白細(xì)胞的鑒定方法 A.流式細(xì)胞技術(shù) B.免疫組化技術(shù) C.原位雜交技術(shù)
 
D.PCR 技術(shù)
 
注：上述技術(shù)方案詳情請(qǐng)登陸本搜索“細(xì)胞分離、
 
純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊(cè)”，并在說(shuō)明書(shū)項(xiàng)目欄下下載使用。
 
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
 
1.    由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：
 

 
2.       本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地 區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離 心時(shí)間，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
 
3.       本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級(jí)原料，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可 能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到分離效果，
離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。